以下是小编给大家收集的质壁分离实验报告，本文共14篇，欢迎大家前来参阅。
篇1：质壁分离实验报告
一、实验原理
当外界溶液浓度大于细胞液浓度时，根据扩散作用原理，水分子会由细胞液中渗出到外界溶液中，通过渗透作用失水;由于细胞壁和原生质层的伸缩性不同，细胞壁伸缩性较小，而原生质层伸缩性较大，从而使二者分开;反之，外界溶液浓度小于细胞液浓度，则细胞通过渗透作用吸水，分离后的质和壁又复原。
二、目的要求
1.初步学会观察植物细胞质壁分离和复原的方法;
2.理解植物细胞发生质壁分离和复原的.原理。
三、重点难点（实验报告不写这一点，可适当调整添加在“注意”这一部分）
1.初步掌握植物细胞质壁分离和复原的实验方法;
2.临时装片的制作;
3.低倍显微镜的使用。实验器材：紫色洋葱的鳞片叶、刀子、镊子、滴管、载玻片、盖玻片、吸水纸（滤纸代替，滤纸可分为剪开几条）、显微镜;质量浓度为0.3g/mL的蔗糖溶液或质量分数为30%的蔗糖溶液、清水。
四、方法步骤
临时装片制作：
1选材：选用紫色特别深的洋葱外表皮;说明：在实验之前，最好将洋葱放在水中浸泡一下，可以使洋葱吸水多一些，而且代谢也比较旺盛，实验效果明显。
2：将洋葱的外层剥去两层（因为处于最外的可能已经死亡）。取表皮：在洋葱的外表皮上，用刀片划“井”字，用镊子轻轻撕取一小块;（关键：最好撕取单层细胞，如果撕的太厚，则会使细胞重叠，严重影响实验效果;）
3制片：在载玻片中央滴上一滴清水，然后将取下的洋葱表皮放在水中，平展开来;加上盖玻片。（注意：1：洋葱表皮不能卷曲起来;2：不能带有气泡;3加盖玻片时，要从一侧大约45°角放下，在载玻片和盖玻片之间充满了清水，以便挤出空气。）
4盖玻片一端滴入糖水，于另一端用吸收纸重复几次吸引（可重复几次滴糖水和吸引的过程）。
质壁分离实验后可接着进行质壁复原
质壁复原实验
处理
取下临时装片，在一侧滴入清水，另一侧再用吸水纸重复几次吸引，以确保洋葱表皮细胞完全浸在几乎是清水中;（注：无吸水纸可先用滤纸代替）
观察
先在低倍镜找到一个质壁分离现象比较明显的细胞，然后观察，可见和刚才相反的现象，中央液泡渐渐变大，颜色变浅，最后原生质层又和细胞壁紧紧地贴在一起;若质壁分离没有复原，则证明外界溶液浓度过高，导致细胞死亡。三 总结：细胞液浓度小于外界溶液浓度时，细胞通过渗透作用失水，发生质壁分离现象;细胞液浓度大于外界溶液浓度时，细胞通过渗透作用吸水，发生质壁分离复原现象。
分离实验特例
如果外界溶液是葡萄糖、硝酸钾、氯化钠、尿素、乙二醇等，质壁分离后因细胞主动或被动吸收溶质微粒而使细胞液浓度增大，植物细胞会吸水引起质壁分离后的自动复原。
注：质壁分离与复原结构示意图
篇2：质壁分离是什么和什么分离
质壁分离的形式是什么
植物细胞常因原生质和细胞壁结合的.紧密程度或原生质的黏性大小的不同而表现不同的质壁分离形式。质壁分离主要有两种形式:凸形和凹形，有时把严重的凹形质壁分离叫做“痉挛形”质壁分离。质壁分离最初由凹形开始，以后或保持这一形式或逐渐转为凸形。保持凹形质壁分离的时间长短与原生质的黏性大小关系很大，凡是原生质黏性大的，能维持较长时间的凹形质壁分离，甚至成为“痉挛形”；而原生质黏性很小的，则较快地转为凸形质壁分离。
篇3：质壁分离的内因和外因
质壁分离是植物生活细胞所具有的一种特性（细胞体积大，成熟的细胞才能发生质壁分离）。当外界溶液的浓度比细胞液的浓度高时，细胞液的.水分就会穿过原生质层向细胞外渗出，液泡的体积缩小，由于细胞壁的伸缩性有限，而原生质体的伸缩性较大，所以在细胞壁停止收缩后，原生质体继续收缩，这样细胞膜与细胞壁就会逐渐分开，原生质体与细胞壁之间的空隙里就充满了外界浓度较高的溶液。
细胞膜为半透膜，有弹性，细胞壁为全透膜，无弹性。当外界液体浓度大于细胞膜内液浓度时，细胞液失水，细胞膜收缩，原生质体变小，而细胞壁无弹性，保持原状，这样原生质体与细胞壁就分离了，当外界溶液浓度恢复时，此时细胞液浓度高，要从外界吸水，导致原生质体恢复胀大，这样就复原了。
篇4：生物实验报告《观察植物细胞的质壁分离与复原》
生物实验报告《观察植物细胞的质壁分离与复原》 -实习报告
一、实验目的1. 初步学会观察植物细胞质壁分离和复原的方法。2. 理解植物细胞发生渗透作用的原理。二、实验原理 当细胞液的.浓度小于外界溶液的浓度时，细胞液中的水分就透过原生质层进入外界溶 液中，使细胞壁和原生质层都出现一定的收缩。由于原生质层比细胞壁的收缩性大，当细胞不断失水时，原生质层就会与细胞壁逐渐分离开，也就是分升了质壁分离当细胞液的浓度大于外界溶液的浓度时，外界溶液中的水分就透过原生质层进入细胞液中，整个原生质层就会慢慢地恢复成原来的状态，使植物细胞逐渐发生质壁分离复原。三、材料用具 紫色洋葱鳞片叶、显微镜、载玻片、盖玻片、滴管、镊子、刀片、吸水纸、清水、0.3g/ml蔗糖溶液四、实验过程（见书P60）物理实验报告 ・化学实验报告 ・生物实验报告 ・实验报告格式 ・实验报告模板五、讨论 1．如果将洋葱表皮细胞浸润在与细胞液浓度相同的蔗糖溶液中，这些表皮细胞会出现什么现象？2．当红细胞细胞膜两侧的溶液具有浓度差时，红细胞会不会发生质壁分离现象？为什么？3．画一个细胞在正常状态下到经过0.3g/ml蔗糖溶液处理，再经过清水处理的细胞变化的一系列模式图。篇5：《质壁分离和复原实验》课堂教学反思
《质壁分离和复原实验》课堂教学反思
《质壁分离和复原实验》课堂教学反思在质壁分离和复原的实验动态不够明显的情况，可以通过适当的技术处理形成动态的过程，用于教学演示。今天上了一堂研讨课《质壁分离和复原实验课》，通过自己的教学设计和课堂实际教学的达成比对，还是有一定的差距，主要的问题是学生对显微镜的熟练程度不够，导致很难展开自己的预设。反思教学过程，很多值得感悟。感悟一：实验教学和概念教学的.结合是潮流这和平时对实验的教学还不够重视有一定的关系，前一阶段一直在重视实验教学和概念教学的结合，看上去不是说说的，确实有它存在的必要性。很多学生做实验和学习知识是脱离的，没有结合，很难理解概念，导致概念性的错误频率过高。寻找实验教学和概念教学的结合是今后需要关注的问题。感悟二：实验教学需要挖掘和拓展在高考中，我们经常抱怨学生在实验试题的得分率低，事实上我们在这方面下了多少功夫？下在哪里了？下在做实验试题上，没有真正落实实验教学。教材中的实验需要挖掘，需要拓展。例如，质壁分离的实验教材中出现是定性实验，是不是可以借助数码显微镜进行定量实验？测量液泡大小，探究细胞液浓度的大小，如果用其他试剂（NaCl、KNO3）需要多少浓度？再如，材料需要挖掘，是不是可以用黑藻更好？洋葱内表皮晒一下，是不是可以做实验？（因为一个洋葱可利用的紫色部分比较少）感悟三：实验教学是最能开发创新能力，激发学生的热情通过一定的设问，开发学生的创新能力，通过操作过程中出现的问题，更能开发学生的创新能力。不拘泥于教学内容，学生可以在操作过程中出现问题，自主探究。例如，内表皮做和外表皮做比对，其他植物也可以做材料进行观察。感悟四：现代技术的使用促进互动教学如果使用数码显微镜，如何用得更好，是值得探究的问题。交互软件的使用可以改变学习方式的转变，提高教学的效率。总之，通过专家的点评，通过同行的建议，通过自身的反思，这样的实验活动完全可以开发出一门微课程。当然需要自己潜心的研究。篇6：细胞活体染色可增加质壁分离实验效果
细胞活体染色可增加质壁分离实验效果
“植物细胞的质壁分离与复原”这一实验，在教科书中指出：该实验材料是紫色的洋葱，不需染色可直接观察到液泡体积大小的变化。洋葱的表皮，实际上只有外表皮呈现出紫色，但对于初学者来说极难取到只有单层细胞的观察材料，多层细胞的材料往往相互重叠呈象，观察效果很不理想。在实践中我们发现洋葱的内表皮的.撕取很易获得只具有单层细胞的薄膜材料，但内表皮却又是无色透明的，用其直接作观察材料，显然效果也不理想。我们通过反复摸索，发现对洋葱细胞活体染色后，再取内表皮做质壁分离和复原实验，实验效果就好多了。具体作法如下：
用小刀在鳞片内侧划成约2cm2的小块，将取下的小块放入0?03％的中性红色溶液中染色10～15min。取出小块稍加冲洗后，两手握住处理过的鳞片两侧并朝内表皮方向对折。即可露出带红色的薄膜内表皮。用镊子取小片内表皮制片观察，会看到细胞的细胞壁染成了醒目的红色，其他部分仍为无色。此时细胞的原生质与细胞壁的对比十分明显，质壁分离与复原的效果也十分理想。
在操作中我们还发现也可以先单独将内表皮染上颜色，然后放在清水中浸泡十来分钟，可褪去细胞壁的颜色，但染成桃红色的液泡的颜色不会褪去，再将内表皮制片做质壁分离与复原的实验效果更为理想。
篇7：生物实验报告《叶绿体中色素的提取和分离》
生物实验报告《叶绿体中色素的提取和分离》 -实习报告
一、实验目的1. 学会提取和分离叶绿体中色素的方法。2. 比较、观察叶绿体中四种色素：理解它们的'特点及与光合作用的关系二、实验原理 光合色素主要存在于高等植物叶绿体的基粒片层上，而叶绿体中的色素能溶于有机溶剂 中。故要提取色素，要破坏细胞结构，破坏叶绿体膜，使基粒片层结构直接与有机溶剂接 触，使色素溶解在有机溶剂中。 叶绿体中的色素有四种，不同色素在层析液(脂溶性强的有机溶剂)中的溶解度不同， 因而随层析液的扩散速度也不同。三、材料用具取新鲜的绿色叶片、定性滤纸、烧杯、研钵、漏斗、纱布、剪刀、小试管、培养皿、毛细吸管、量筒、有机溶剂、层析液(20份石油醚、2份丙酮、1份苯混合)、二氧化硅、碳酸钙。四、实验过程（见书P54）1.提取色素： 2.制备滤纸条： 3.色素分离，纸层析法。（不要让滤液细线触及层析液）4.观察：层析后，取出滤纸，在通风处吹干。观察滤纸条上出现色素带的数目、颜色、位置和宽窄。结果是：4条色素带从上而下依次是：胡萝卜素(橙黄色)、叶黄素(黄色)、叶绿素a(蓝绿色)、叶绿素b(黄绿色)。（）。五、讨论 1.滤纸条上的滤液细线为什么不能接触到层析液？ 2．提取和分离叶绿体中色素的关键是什么？篇8：分离壁式地下连续墙有哪些特点？
，
这种布置的特点是地下连续墙与主体结构结合简单，且各自受力明确。地下连续墙在施工和使用时期都起挡土和防渗的作用，主体结构的外墙和柱子只承受垂直荷载。
篇9：大鼠骨髓间充质干细胞的分离与培养
大鼠骨髓间充质干细胞的分离与培养
为了确定大鼠骨髓间充质干细胞(Mesenchymal stem cells,MSCs)体外分离和培养的方法,建立了稳定的MSCs体外培养扩增体系,通过密度梯度离心和贴壁筛选法分离培养大鼠MSCs,观察了细胞的形态,研究了其增殖及生长特征,并应用流式细胞术测定了细胞周期及CD29,CD44,CD45和HLA-DR的.表达.结果表明,在体外培养条件下大鼠MSCs贴壁生长,为成纤维细胞样;CD45和HLA-DR的表达呈阴性,CD29和CD44的表达呈阳性;细胞周期的G0/G1期约占95%,具有原始细胞的特征.说明建立的体外培养扩增体系可获得形态单一、生长稳定、增殖性较强、较均一的大鼠MSCs.
作 者：李延清 刘霞 LI Yan-qing LIU Xia 作者单位：李延清,LI Yan-qing(延安大学,生命科学学院,陕西,延安,716000)刘霞,LIU Xia(延安大学,生命科学学院,陕西,延安,716000;西北农林科技大学,动物科技学院,陕西,杨凌,712100)
刊 名：西北农林科技大学学报（自然科学版） ISTIC PKU英文刊名：JOURNAL OF NORTHWEST SCI-TECH UNIVERSITY OF AGRICULTURE AND FORESTRY(NATURAL SCIENCE EDITION) 年，卷(期)： 34(5) 分类号：Q813.1+1 关键词：大鼠 骨髓间充质干细胞 细胞形态 细胞周期 密度梯度离心 流式细胞术篇10：生活污水源分离、分质处理与资源化
生活污水源分离、分质处理与资源化
摘要：本文讨论了集中式和分散式污水处理系统的`技术现状、作用和优缺点,指出生活污水源分离、分质处理和回用是实现最少化排污、最大化营养物再利用和水资源循环的可行选择.文章进一步讨论了生活污水源分离后的灰水、黑水、黄水和雨水等分类收集处理的技术发展现状和进展.作 者：马伟辉 陈洪斌 屈计宁 MA Wei-hui CHEN Hong-bin QU Jin-ning 作者单位：同济大学环境科学与工程学院,上海,92 期 刊：中国沼气 ISTIC Journal：CHINA BIOGAS 年，卷(期)：, 26(4) 分类号：X703 S216.4 关键词：集中式处理 分散式处理 污水源分离 分质处理 回用篇11：竹质中孔活性炭甲烷吸附分离及存储性能研究
竹质中孔活性炭甲烷吸附分离及存储性能研究
实验以毛竹废料为原料采用磷酸活化法制备了既有较高比表面积又含有大量中孔的活性炭,测定了干燥活性炭的CH4、C02、N2及O2吸附等温线及预吸附水活性炭的CH4吸附等温线,以考察其对甲烷的吸附分离及存储性能.实验结果表明:干燥活性炭对甲烷的吸附性能与其它气体存在较大差异,可应用于吸附分离CH4/C02、CH4/N2、CH4/O2及CH4/空气气体混合物中的'甲烷气体.在275K条件下(水炭比为2.43).预吸附水的活性炭在3.49MPa下的甲烷储量达10.58mmol/g,是同温同压条件下干燥活性炭甲烷储量的1.72倍,并远远大于同温同压条件下其它预吸附水活性炭的甲烷储量,可在较低压力条件下(<4MPa)实现甲烷的高效存储.
作 者：王玉新 周亚平WANG Yu-xin ZHOU Ya-ping 作者单位：天津大学理学院化学系,天津,300072 刊 名：天然气化工 ISTIC PKU英文刊名：NATURAL GAS CHEMICAL INDUSTRY 年，卷(期)：2008 33(3) 分类号：O647 TQ028 关键词：活性炭 甲烷 水合物 吸附分离 存储篇12：灵芝未破壁孢子粉水溶性多糖的分离与鉴定
灵芝未破壁孢子粉水溶性多糖的分离与鉴定
目的'研究灵芝未破壁孢子粉水溶性多糖(GLPS3)的组成和性质.方法粗多糖经反复冻融、Sevag法脱蛋白、高速离心、柱色谱等方法分离纯化得组分GLPS3.经HPLC、比旋度测定、醋酸纤维薄膜电泳等方法,证明其组成的均一性.同时运用气相色谱、红外光谱等方法对其组成和性质进行研究.结果GLPS3为均一组分,GC分析其单糖组成为Gal和Glc,摩尔比为1:5.05.结论GLPS3为中性杂多糖,平均相对分子质量为1.41×105左右.
作 者：张丽霞 赵桂梅 吴明江 曹鹏宇 张丽萍 ZHANG Li-xia ZHAO Gui-mei WU Ming-jiang CAO Peng-yu ZHANG Li-ping 作者单位：张丽霞,ZHANG Li-xia(大庆师范学院生命科学系,黑龙江,大庆,163712)赵桂梅,吴明江,曹鹏宇,张丽萍,ZHAO Gui-mei,WU Ming-jiang,CAO Peng-yu,ZHANG Li-ping(东北师范大学生命科学学院,长春,130024)
刊 名：中国药学杂志 ISTIC PKU英文刊名：CHINESE PHARMACEUTICAL JOURNAL 年，卷(期)： 41(3) 分类号：Q539 关键词：灵芝 多糖 分离 组成篇13：分离培养及鉴定骨髓间充质干细胞的方法探析论文
分离培养及鉴定骨髓间充质干细胞的方法探析论文
骨髓间充质干细胞（BMSCs）也被称为间质祖细胞，由于其巨大的增殖和多向分化潜能，被认为是再生医学、基因治疗和细胞治疗的理想种子来源，已被广泛进行研究[1-3].目前，BMSCs在动物实验和临床应用上取得了巨大的成果，在骨、软骨、肌腱、神经胶质修复、心脏疾病、心肌梗塞、肝脏损伤等方面取得了重大突破[4-6],并且可避免胚胎干细胞和异基因干细胞治疗所涉及的伦理道德和免疫排斥问题，有利于细胞移植。但是骨髓中的BMSCs含量极少，约占骨髓全细胞的0.001%~0.010%[7];因此，需要在体外分离纯化、培养扩增来满足临床应用和实验研究。研究表明，不同分离方法和首次换液方式对BMSCs的增殖培养有很大的影响[8].本试验通过观察2种不同分离方法和不同首次换液时间对兔BMSCs生物活性的影响，旨在建立一种有效的分离培养及鉴定BMSCs的方法，以便获得大量、高纯度、高活性、培养周期短的BMSCs,为下一步研究和临床实验提供基础。
1 材料与方法
1.1实验动物1月龄雄性新西兰大耳白兔1只，由河南省实验动物中心提供。
1.2主要试剂和仪器胎牛血清（北京四季青）；DMEM-F12（Gibco）；胰蛋白酶（北京拜尔迪生物公司）；DMSO（Gibco）；红细胞裂解液（北京赛驰生物技术有限公司）；生物素标记山羊抗兔IgG、HRP标记链霉亲和素、DAB显色试剂盒、改良型苏木素（北京华肽先锋）；兔抗兔CD34、CD44、CD99抗体（北京博奥森）；封闭山羊血清（北京博奥森）。
HF151UV型CO2培养箱（Heal Force）；倒置显微镜（Leica）;800型离心机、85-2恒温磁力搅拌器：金坛市大地自动化仪器厂；数码相机：日本佳能IXUS 980IS;电子天平：METTLER TOLEDO AL104;超净工作台：AIR TECH;FX101-2型电热鼓风干燥箱：上海树立仪器仪表有限公司；pH计：上海雷磁仪器厂。
1.3 BMSCs的提取用陆眠宁（846）将1月龄新西兰大耳白兔麻醉，腿部去毛消毒，无菌条件下分离股骨、胫骨，剔除脂肪和肌肉，PBS液反复冲洗，剪断两侧干骺端，尽量多保留干骺端，DMEM-F12培养液反复冲洗骨髓腔于A、B两个10mL的离心管内，直至骨髓腔发白，1 000r/min离心5min,弃上清。
1.4全骨髓贴壁法A管用PBS重悬细胞，1 000r/min离心5min洗涤2次，弃上清。吸取3mL含10%FBS的DMEM-F12（1∶100双抗）培养液重悬细胞，接种至3个25cm2培养瓶，补足培养液至5mL,轻柔吹打均匀。置于37℃、5%CO2条件下培养。以后每3d换液1次，待细胞生长融合至80%时传 代 培 养。 先 弃 去 旧 培 养 液，PBS液 浸 洗。0.25%胰蛋白酶+0.02%EDTA,37℃条件下孵育3min,含血清的DMEM-F12终止消化。以1∶2的比例传代培养，每3d换液1次。每天在倒置显微镜下观察细胞形态。
1.5红细胞裂解法B管加入1mL红细胞裂解液重悬细胞，静置1~3min,待液体由红色变为白色后，加 入5 mL PBS液，1 000r/min离 心2次，5min/次，弃 上 清。 吸 取3 mL含10% FBS的DMEM-F12（1∶100双抗）培养液重悬细胞，接种至3个25cm2培养瓶，补足培养液至5mL,轻柔吹打均匀。置于37℃、5%CO2条件下培养。
2d后首次换液，以后每3d换液1次，待细胞生长融合至80%时传 代 培 养。 先 弃 去 旧 培 养 液，PBS液 浸 洗。0.25%胰蛋白酶+0.02%EDTA,37℃条件下孵育3min,含血清的DMEM-F12终止消化。以1∶2的比例传代培养，每3d换液1次。每天倒置显微镜下观察细胞形态。
1.6兔BMSCs细胞活性检测及生长曲线绘制培养48h时，各取一瓶细胞，弃去培养基，用PBS冲洗2遍，倒置显微镜下观察细胞。0.25%胰蛋白酶+0.02%EDTA消化后，0.4%台盼蓝染色，血球计数板计数活细胞（未着色）和死细胞（着色细胞）。分别计算出2种不同分离方法的细胞活性。上述试验重复3次。
选取生长良好的P1、P3和P8代细胞，以2.0×104个/孔，接种于24孔培养板中，每孔1mL,每3d换液1次，每隔1d取3孔，消化后计数，取其平均值为当天的细胞数，连测8d,以培养时间为横坐标，细胞数为纵坐标，绘制细胞生长曲线。
1.7首次换液时间对兔BMSCs的影响将用红细胞裂解法分离得到的兔BMSCs按首次换液时间随机分为4组：12h换液组、24h换液组、48h换液组、72h换液组，以后每3d换液1次，记录传代前各组0~3代各代培养时间，各代细胞均保留3瓶。
1.8细胞免疫组化鉴定兔BMSCs收集红细胞裂解法的P3代细胞，制备细胞爬片，常规SABC免疫组织 化 学 方 法 检 测 表 面 抗 原CD34、CD、CD45、CD90的表达。
1.9统计学处理所得数据以均数±标准误表示，应用SPSS16.0统计学软件进行处理，采用单因素方差分析（one-way ANOVA），用Microsoft Excel软件作图。
2 结果
2.1不同分离方法对兔BMSCs形态和生长的影响
刚接种时，2种不同分离方法所得的原代细胞在倒置显微镜下观察细胞呈圆形，大小一致，折光性强，不容易区分。培养48h后，A、B两组细胞均可看见有圆形、短梭形、多角形细胞贴壁。
B组贴壁细胞较A组细胞多（图1）。台盼蓝染色检测细胞活性全骨髓贴壁法（A组）为90%,红细胞裂解法（B组）为96%.随着培养的继续，大量细胞贴壁，并出现典型的BMSCs细胞集落，紧密排列。
A组细胞生长较缓慢，所得细胞纯度较低；B组细胞生长较快，纯度较高。原代细胞达到传代的时间A组为10.2d,B组为7.2d,差异显着（P<0.05）。B组细胞P3代细胞呈旋涡状或放射状生长，细胞形态大小均一（图2）.
2.2兔BMSCs生长曲线绘制
通过细胞计数法绘制细胞生长曲线，对兔BMSCs的生长特性进行鉴定。结果显示，P1、P3、P8代细胞培养过程中，细胞生长具有相似的特点：1~2d细胞处于潜伏期；3~6d细胞处于对数生长期；6~8d生长逐渐减慢，开始进入平台期（图3）。传代细胞生长相对稳定，随着传代次数的增加，细胞会出现衰老的特征，增殖速度减慢。
2.3兔BMSCs的鉴定
结果显示，CD44、CD90抗原表达阳性，CD34抗原表达阴性（图4），符合BM-SCs表面分子标记特征。
2.4首次换液时间对兔BMSCs培养周期的影响红细胞裂解法分离兔BMSCs,分别在12,24,48,72h首次换液，结果（表1）显示，24h换液组P0、P1、P2、P3代以及总时间的'细胞培养时间与其他各组比较差异极显着（P<0.01），表明24h首次换液可缩短细胞培养周期。
3 讨论
骨髓中BMSCs的含量很低，一般为0.001%~0.010%,其数量和生长能力与年龄呈显着负相关，想要在临床实践中利用BMSCs,就必须实现其在体外的分离培养和扩增。目前，常用的BMSCs的分离和纯化方法有：全骨髓贴壁法、红细胞裂解法、密度梯度法、免疫磁珠分选法和流式细胞术分选法，后2种方法筛选BMSCs的分选效率和纯度均较高，但是对实验条件和设备要求较高，费 用 昂 贵，并 且BMSCs表面缺乏特异性标志，在具体操作过程中可造成细胞的损伤和死亡，所以较少使用[9].密度梯度法由于分离液往往对BMSCs有一定的损伤，且离心会丢失大量的细胞，对细胞活性有影响，因此应用受到很大限制[10].本试验通过比较全骨髓贴壁法和红细胞裂解法，发现2种分离方法均可得到较均一的长梭形细胞，聚集成旋涡状均匀生长。但是红细胞裂解法分离得到的BMSCs在48h时贴壁细胞显着多于全骨髓贴壁法，并且细胞活性较高，细胞密度达到80%融合，首次传代时间也较短。这可能是因为全骨髓贴壁分离法保留了造血干细胞和其他杂细胞，在体外培养过程中混杂的细胞会对BMSCs的生长及贴壁产生影响，所得BMSCs纯度和细胞活性均较低；而红细胞裂解液的有效成分是氯化铵，能够利用红细胞的渗透脆性特异性的破坏无核红细胞膜而去除红细胞和血小板，并且对有核细胞无影响，从而去除骨髓中含量最高的细胞成分，经红细胞裂解液处理后，减小了杂细胞对其贴壁的影响，为BMSCs贴壁保留了空间，有利于BMSCs的早期贴壁[11],所得细胞纯度高，且细胞活力不受影响。因此，利用红细胞裂解法，能够在较短的时间里获得大量的高纯度、高活性的目的细胞，是一种有效的分离纯化BMSCs的方法。
有研究表明，首次换液时间对BMSCs的生殖增长有一定的影响。原代首次换液时间过早，由于骨髓冲洗液中其他细胞分泌滋养BMSCs的生长因子等多种有益成分丢失，贴壁细胞数量减少，细胞生长缓慢，细胞培养周期延长；原代首次换液时间过晚，杂质贴壁紧密，细胞代谢产物等有害成分增多，造血干细胞分泌的生长因子使BMSCs出现分化等，从而导致细胞增殖周期延长。本试验分别在12,24,48,72h首次换液，24h换液组，首次传代时间及细胞培养总周期与其他各组比较，差异有显着性意义，能显着缩短细胞培养时间，因此，培养24h首次换液为最佳首次换液时间。
BMSC目前还没有发现特异性的表面标记物，其鉴定尚无统一标准。
BMSC的表面抗原具有非专一性，表达内皮细胞、间质细胞、表皮细胞和肌肉细胞的表面标志，它包括（1）粘附分子CD44、CD105、CD166、CD54、CD102等；（2）整 合 素 家 族 成 员CD29、CD104、CD49a等；（3）其他CD90等[12-14].不表达造血干细胞表面标志，如CD34、CD45、CD11b、CD11a等[15-16].BMSCs,结 果 显 示，BMSCs阳 性 表 达CD90和CD44,造 血 干 细 胞 标 志CD34呈 阴 性 表 达，符 合BMSCs的表面标志物特征，证实我们体外分离培养的细胞为纯化的BMSCs.
综上所述，通过红细胞裂解液法分离得到的兔BMSCs生长增殖旺盛，生物学性状稳定，于培养24h首次换液可显着缩短细胞的培养周期，便于后续的试验研究。
篇14：猪脂肪间充质干细胞的分离培养及其成脂分化
猪脂肪间充质干细胞的分离培养及其成脂分化
脂肪间充质干细胞(Adipose mesenchymal stem cell,AMSCs)是一类来源于脂肪组织并具有多向分化潜能的干细胞.近年来的研究证明,脂肪组织具有取材方便和干细胞含量高的.优势,有望在研究与应用领域成为骨髓干细胞的替代物.猪是一种比啮齿类更接近人类的模式动物,具有较强的脂肪沉积能力.本研究探讨了猪脂肪间充质干细胞的体外分离纯化、培养扩增和向脂肪细胞诱导分化的条件.采用Ⅰ型胶原酶消化分离脂肪微管基质成分,传代培养扩增,流式细胞仪检测细胞表面标记.取第3-7代AMSCs,采用不同方法诱导AMSCs向脂肪细胞分化,光学显微镜下可观察到诱导后的细胞内有高折光性的小脂滴出现,油红O染色成阳性,不同诱导方法诱导率不同.被诱导细胞用RT-PCR可检测到脂肪细胞分化标志基因LPL和PPARγ的表达.结果表明可以从脂肪组织中分离培养出AMSCs,经传代后可提高其纯度.CD44、CD105表达呈阳性,CD14、CD34、S-100、HLA-DR呈阴性,在合适的诱导条件下,可向脂肪细胞分化.
作 者：张国华 屈长青 杨公社 ZHANG Guo-Hua QU Chang-Qing YANG Gong-She 作者单位：张国华,杨公社,ZHANG Guo-Hua,YANG Gong-She(西北农林科技大学动物科技学院,陕西,杨凌,712100)屈长青,QU Chang-Qing(西北农林科技大学动物科技学院,陕西,杨凌,712100;阜阳师范学院生物系,安徽阜阳,236032)
刊 名：动物学报 ISTIC PKU英文刊名：ACTA ZOOLOGICA SINICA 年，卷(期)：2006 52(5) 分类号：Q95 关键词：猪 脂肪间充质干细胞 脂肪细胞 分化★实验报告
★职责分离
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