以下文章小编为您整理的马铃薯亚细胞结构线粒体DNA的分离与提取，本文共7篇，供大家阅读。
篇1：马铃薯亚细胞结构线粒体DNA的分离与提取
马铃薯亚细胞结构线粒体DNA的分离与提取
以马铃薯块茎为材料,通过差速离心分离出线粒体,过垫梯度离心进一步纯化.显微镜下观察所得的线粒体的`纯度、形态;并用数码相机进行照相.线粒体样用SDS、蛋白酶K、核酸酶处理后用饱和酚、苯酚/氯仿及氯仿/异戊醇提取处理,乙醇沉淀,提取得线粒体DNA(mtDNA).紫外分光光度计检测提取浓度、纯度,1%琼脂糖电泳获得清晰、整齐的条带.
作 者：卢太白 韦伟 徐雷 LU Tai-bai WEI Wei XU Lei 作者单位：西北农林科技大学生命学院,陕西杨凌,712100 刊 名：西北农业学报 ISTIC PKU英文刊名：ACTA AGRICULTURAE BOREALI-OCCIDENTALIS SINICA 年，卷(期)： 15(5) 分类号：Q503 Q523 关键词：线粒体 mtDNA 差速离心 过垫梯度离心篇2：枸杞线粒体DNA的提取
枸杞线粒体DNA的提取
以幼嫩叶片为材料,经榨汁机破碎组织和细胞,采用差速离心法分离出线粒体,然后经Sarkosyl和CTAB裂解沉淀、氯仿/异戊醇反复抽提、RNA酶解等步骤分离纯化mtDNA.检测结果表明,采用该方法提取的`mtDNA纯度高、污染少、电泳条带清晰.
作 者：刘建利 任贤 曹君迈 张利义 周云峰 作者单位：刘建利,任贤,曹君迈,周云峰(北方民族大学生命科学与工程学院,宁夏,银川,750021)张利义(中国农业科学院果树研究所,辽宁,兴城,125100)
刊 名：林业科技 PKU英文刊名：FORESTRY SCIENCE & TECHNOLOGY 年，卷(期)： 33(4) 分类号：Q943.2 关键词：枸杞 线粒体DNA篇3：基于棉花BAC文库的线粒体DNA的提取方法
基于棉花BAC文库的线粒体DNA的提取方法
以棉花的黄化苗为材料,根据棉花自身的特点,利用差速离心的.方法分离线粒体后再经低熔点琼脂糖包埋裂解提取了完整的mtDNA.其质量完全可以满足BAC文库构建中限制性酶切、PCR检测、分子杂交筛选等实验的要求.
作 者：冯娜 罗淑萍 郭三堆 FENG Na LUO Shu-ping GUO San-dui 作者单位：冯娜,FENG Na(中国农业科学院,生物技术研究所,北京,100081;新疆农业大学,农学院,乌鲁木齐,830052)罗淑萍,LUO Shu-ping(新疆农业大学,农学院,乌鲁木齐,830052)
郭三堆,GUO San-dui(中国农业科学院,生物技术研究所,北京,100081)
刊 名：新疆农业大学学报 ISTIC PKU英文刊名：JOURNAL OF XINJIANG AGRICULTURAL UNIVERSITY 年，卷(期)： 29(3) 分类号：Q74 关键词：棉花 提取 线粒体DNA BAC文库篇4：dna粗提取与鉴定
dna粗提取与鉴定
dna粗提取与鉴定实验原理
DNA在氯化钠溶液中的溶解度，是随着氧化钠的浓度的变化而改变的。当氯化钠的物质的量浓度为 2 mol/L时，DNA的溶解度最大，浓度为 0.14 mol/L时，DNA的溶解度最低。利用这一原理，可以使溶解在氯化钠溶液中的DNA析出。
DNA不溶于95%的酒精溶液，但是细胞中的某些物质则可以溶于酒精溶液。利用这一原理，可以进一步提取出含杂质较少的DNA。
DNA中含有脱氧核糖，能与二苯胺(沸水浴)反应生成蓝色物质，因此，二苯胺可以作为鉴定DNA的试剂。
目的要求
1. 学会DNA的粗提取和鉴定的方法。
2. 观察提取出来的DNA物质的颜色和形状。
材料用具
材料：活鸡或鲜血鸡血。
仪器：离心机、恒温水裕锅、载玻片，玻璃棒，滤纸，滴管，量简(100 mL，l个)，烧杯(100 mL，l个，50 mL、500 mL各 2个)，试管(20 mL，2个)，漏斗，试管夹，纱布。
试剂：酒精的体积分数为95%的溶液(实验前置于冰箱内冷却24 h)，蒸馏水，柠檬酸钠的质量浓度为 0.1g/mL的溶液，氯化钠的物质的量浓度分别为 2 mol/L和0.015 mol/L的溶液，二苯胺试剂。
方法步骤
实验前需要制备鸡血细胞液(由教师完成)，制备的方法是：取柠檬酸钠的质量浓度为 0.1 g/mL的溶液(抗凝剂)100 mL，置于500 mL烧杯中。将宰杀活鸡流出的鸡血(约180 mL)注入烧杯中，同时用玻璃棒搅拌，使血液与柠檬酸钠溶液充分混合，以免凝血。然后，将血液倒入离心管内，用 1000 r/min的离心机离。2min，此时血细胞沉淀于离心管底部。实验时，用吸管除去离。心管上部的澄清液，就可以得到鸡血细胞液。
1.提取鸡血细胞的细胞核物质
将制备好的鸡血细胞液5 mL～10mL，注入到50 mL烧杯中。向烧杯中加入蒸馏水20 mL，同时用玻璃棒充分搅拌5 min，使血细胞加速破裂。然后，用放有纱布的漏斗将血细胞液过滤至500mL。取其滤液。
2.溶解细胞核内的DNA
将氯化钠的物质的量浓度为 2 mol的溶液40mL加入到滤液中，并摇动烧杯，使其混合均匀，这时DNA在溶液中呈溶解状态。
3.析出含DNA的粘稠物
沿烧杯内壁缓缓加入蒸馏水，同时用玻璃棒不停地轻轻搅拌，这时烧杯中有丝状物出现，注意观察丝状物呈什么颜色。继续加入蒸馏水，溶液中出现的.粘稠物会越来越多。当粘稠物不再增加时停止加入蒸馏水(这时溶液中氯化钠的物质的量浓度相当于0.14 mol/L)。
4.滤取含DNA的粘稠物
用放有多层纱布的漏斗，过滤步骤3中的溶液至 500mL的烧杯中，含 DNA的粘稠物被留在纱布上。
5.将DNA的粘稠物再溶解
取 1个 50 mL烧杯，向烧杯内注入氯化钠的物质的量浓度为 2 mol/L的溶液 20mL。用钝头镊子将纱布上的粘稠物夹至氯化钠溶液中，用玻璃择不停地搅拌，使粘稠物尽可能多地溶解于溶液中。
6.过滤含有DNA的氯化钠溶液
取1个100 mL烧杯，用放有两层纱布的漏斗过滤步骤5中的溶液。取其滤液，DNA溶于滤液中。
7.提取含杂质较少的DNA
在上述滤过的溶液中，加入冷却的、酒精的体积分数为 95%的溶液 50mL(使用冷却的酒精，对DNA的凝集效果较佳)，并用玻璃棒搅拌，溶液中会出现含杂质较少的丝状物。用玻璃棒将丝状物卷起，并用滤纸吸取上面的水分。这种丝状物的主要成分就是DNA 。注意观察丝状物是什么颜色的。
8.DNA的鉴定
取两支20 mL的试管，各加入氯化钠的物质的量浓度为0.015 mol/L的溶液5 mL，将丝状物放入其中一支试管中，用玻璃棒搅拌，使丝状物溶解。然后，向两支试管中各加入4mlL的二苯胺试剂。混合均匀后，将试管置于沸水中加热 5 min，待试管冷却后，观察并且比较两支试管中溶液颜色的变化。将观察的结果填写在《实验报告册》上。
结论
步骤8的2支试管中溶液颜色的变化说明了什么?将得出的结论填写在《实验报告册》上。
讨论
1.提取鸡血中的DNA时，为什么要除去血液中的上清液?
2.步骤回和步骤3中都需要加入蒸馏水，两次加入的作用相同吗?为什么?
3.DNA的直径约为20×10-10 m，实验中出现的丝状物的粗细是否表示1个DNA分子直径的大小?
篇5：线粒体DNA的异质性与检测方法
线粒体DNA的异质性与检测方法
线粒体DNA的异质性在生物学、医学、法医、生物技术等领域有重要的应用.本文从自然发生(包括体细胞突变、父系渗入和杂交)和人工产生(包括转基因、细胞融合、核移植和转线粒体)两大方面系统地介绍了线粒体DNA异质性的产生机制及其遗传.并介绍了线粒体DNA异质性的检测方法,已知突变位点mtDNA异质性的检测方法有原位PCR技术、PCR-RFLP和实时荧光定量PCR技术,未知突变位点mtDNA异质性的`检测方法有长PCR技术、时相温度梯度凝胶电泳(TTGE)和变性高效液相色谱(DHPLC)等.最后对克隆生物中线粒体异质性检测的应用实例作了介绍.
作 者：刘艳 胡婧 黄原 LIU Yan HU Jing HUANG Yuan 作者单位：陕西师范大学生命科学学院,西安,710062 刊 名：动物学杂志 ISTIC PKU英文刊名：CHINESE JOURNAL OF ZOOLOGY 年，卷(期)： 41(5) 分类号：Q95 关键词：mtDNA 异质性 父系渗入 细胞融合 核移植 转线粒体 检测篇6：dna的粗提取与鉴定
教学目的
1、初步掌握DNA的粗提取和鉴定的方法
2、观察提取出来的DNA物质
实验原理
1、DNA在NaCl溶液中的溶解度，是随着NaCl的浓度的变化而改变的。当NaCl的物质的量浓度为0.14mOl/L时,DNA的溶解度最低。利用这一原理，可以使溶解在NaCl溶液中的DNA析出。
2、DNA不溶于酒精溶液，但是细胞中的某些物质则可以溶于酒精溶液。利用这一原理，可以进一步提取出含杂质较少的DNA。
3、DNA遇二苯胺(沸水浴)会染成蓝色，因此，二苯胺可以作为鉴定DNA的试剂。
注意事项
1、步骤3析出含DNA的黏稠物中，蒸馏水要沿烧杯内壁缓缓加入，不能一次快速倒入。
2、实验中有多个步骤都要用玻璃棒进行搅拌，但是在不同的步骤中玻璃棒的用法不同。
实验用具
鸡血细胞液(5～10mL);体积分数为95%的冷酒精，蒸馏水，质量浓度为0.1g/mL的柠檬酸钠溶液，物质的量浓度分别为2mol/L和0.015mol/L的NaCl溶液，二苯胺试剂;烧杯(100mL，1个， 50mL， 500mL，各2个)，漏斗，试管(20mL，2个)，玻璃棒，滴管，量筒(100mL，1个)，纱布，镊子，滤纸，铁架台，铁环，三角架，酒精灯，石棉网，载玻片，试管夹。
课时安排
一课时
课前准备
制备鸡血细胞液，方法是：将质量浓度为0.1g/mL的柠檬酸钠溶液100mL，置于500mL烧怀中，注入新鲜的鸡血(约180mL)，用玻璃棒搅拌，使其充分混合，以免凝血。静置于冰箱内一天，使血细胞自行沉淀。也可以用离心机离心2 min(转速1000转/分)。用吸管吸去上清液。
板书
篇7：dna的粗提取与鉴定
实验原理
1、析出溶解在NaC1溶液中的DNA。
2、用冷酒精提取出含杂质较少的DNA。
3、DNA在沸水浴时被二苯胺染成蓝色。
方法步骤：
1、提取鸡血细胞的细胞核物质：顺时针方向搅拌，稍快，稍重。 5 min
2、溶解细胞核内的DNA
3、析出含DNA的黏稠物：蒸馏水300mL，逆时针方向搅拌，缓慢
4、过滤：取黏稠物
5、再溶解：顺时针方向搅拌，较慢。3 min
6、过滤：取滤液。
7、提取出含杂质较少的DNA，逆时针方向搅拌，稍慢。5 min
8、DNA的鉴定：沸水浴5min((1)无变化(2)蓝色)
上节课我们通过几个验证性实验，证明了DNA是主要的遗传物质。那么DNA是什么样的物质呢?今天我们就通过实验将它提取出来，进行观察和鉴定。
通过预习，我们知道选用鸡血细胞液作为实验材料。在制备鸡血细胞液时，所用的柠檬酸钠有防止血液凝固的作用。
制备过程中，一定要用刚宰杀的.鸡的新鲜血，并且要与抗凝剂充分混合，防止凝血。我们采用静置一天的方法，获得鸡血细胞液。
大家在动手做实验之前先要明确几个需要注意的问题。
1、要严格按照实验指导的方法步骤去操作。
2、实验中有多个步骤都要用玻璃棒进行搅拌，使用时玻璃棒不要碰到烧杯底，在不同的步骤中玻璃棒的用法不同，每一步的用法参照黑板上的指导去操作。
3、在DNA的鉴定中，所用的二苯胺是一种有毒性的试剂，大家在使用时注意不要让药液接触到皮肤或身体的其他部位，也不要近距离观察。
下面在实验进行过程中，要思考每一操作步骤要达到什么目的。
在进行步骤1时，利用搅拌的5分钟，做如下提问：
为什么要加蒸馏水?加入蒸馏水后细胞将会怎样?
(让细胞内溶液的浓度大于周围溶液的浓度，细胞会吸水以至胀破)
为什么要用力搅拌?
(可以加速血细胞和细胞核的破裂)
所以下一步骤过滤将滤去的是细胞膜和核膜等物质。
在进行步骤3时，要向全班明确：这一步骤是这个实验成败的关键，注意加蒸馏水的方法和使用玻璃棒的方法，千万不能太快太猛，防止打碎DNA。
观察滤取出来的黏稠物的颜色。
有的同学提取的黏稠物较少，原因可能是在溶解DNA时不充分，也可能是析出黏稠物时搅拌的快了。
将黏稠物再溶解时一定要充分，多搅拌。以免有DNA损失。
加入冷酒精时动作要慢。
当玻璃棒上出现丝状物缠绕时，继续慢慢搅拌。至不再增加时，取出吸干上面的水分。仔细观察丝状物呈什么颜色?(黄色)
这些丝状物要用二苯胺鉴定。使用二苯胺时要注意不要接触到药液。进行沸水浴时，在实验室较为通风的地方集体进行。
利用沸水浴的5 min。
步骤3中加入蒸馏水的目的?与步骤1有什么区别?
(步骤3中加蒸馏水是使NaCl溶液的浓度逐渐降至0.14mol/L，使DNA的黏稠物析出。而步骤1加蒸馏水是为了让细胞吸水胀破)
步骤7为什么要加50mL的冷酒精?
(因为DNA不溶于冷酒精，而其他物质可以溶解在酒精中，使含杂质较少的DNA丝状物可以析出。悬浮于溶液中)
现在大家从水浴锅中拿出试管，比较两个试管中溶液的颜色有什么不同?
(有丝状物的试管变成蓝色，另一试管还是原来颜色)
这一鉴定结果说明什么问题?
(提取出的丝状物是DNA)
那么你看到的丝状物的粗细是不是DNA分子的直径呢?
(不是。DNA分子直径只有2nm。丝状物是多个DNA分子聚在一起形成的)
下面请同学们将实验用具，按原样摆放整齐，实验桌要保持清洁。
今天我们通过实验将DNA提取出来进行了观察和鉴定，那么DNA的化学组成，分子结构和复制是怎样的?我们下节课再继续研究。
★用线粒体DNA D-loop区序列探讨盘丽鱼属鱼类系统分类
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