以下是小编精心整理的诱骗受体DcR3的基因构建、表达及特异性鉴定，本文共10篇，仅供参考，希望能够帮助到大家。
篇1：诱骗受体DcR3的基因构建、表达及特异性鉴定
诱骗受体DcR3的基因构建、表达及特异性鉴定
目的: 构建适于原核表达的.人诱骗受体DcR3基因, 并进行重组蛋白的表达纯化及特异性鉴定.方法: 查得人DcR3 Cdna全序列, 将其分段设计引物, 通过重叠PCR获得DcR3基因.构建Pet-22b(+)/DcR3表达载体, 转化大肠杆菌Rosseta-gami, IPTG诱导表达, Ni柱纯化.采用ELISA进行特异性鉴定.结果: 通过重叠PCR获得了编码正确氨基酸序列的目的基因.目的蛋白以包涵体的形式表达, 表达量占菌体总蛋白的30%以上.纯化后, 蛋白纯度达95%以上.ELISA结果表明所纯化的蛋白可与抗DcR3抗体发生特异结合.结论: 诱骗受体DcR3基因的成功构建、表达及纯化, 为进一步的功能研究奠定了基础.
作 者：李文珠 陶惠然 颜江华 张长弓 苏金华 王阶平杨桂旺 庄国洪 作者单位：李文珠,王阶平,杨桂旺,庄国洪(厦门大学生命科学学院,福建,厦门,361005)陶惠然,颜江华,张长弓,苏金华(厦门大学医学院抗癌研究中心,福建,厦门,361005)
刊 名：细胞与分子免疫学杂志 ISTIC PKU英文刊名：CHINESE JOURNAL OF CELLULAR AND MOLECULAR IMMUNOLOGY 年，卷(期)： 22(2) 分类号：Q786 关键词：DcR3 基因构建 基因表达篇2：植物乙烯受体基因家族成员的功能特异性
植物乙烯受体基因家族成员的功能特异性
文章就乙烯受体家族成员的`结构、功能特异性和表达的差异研究进展做了介绍.
作 者：王中凤 应铁进 张英 WANG Zhong-Feng YING Tie-Jin ZHANG Ying 作者单位：王中凤,张英,WANG Zhong-Feng,ZHANG Ying(广西工学院生物与化学工程系,广西,柳州,545006)应铁进,YING Tie-Jin(浙江大学生物系统工程与食品学院,杭州,310029)
刊 名：植物生理学通讯 ISTIC PKU英文刊名：PLANT PHYSIOLOGY COMMUNICATIONS 年，卷(期)：2006 42(2) 分类号：Q94 关键词：乙烯受体 基因表达 乙烯反应 功能 结构篇3：人Hepsin基因表达型载体的构建及鉴定
人Hepsin基因表达型载体的构建及鉴定
应用RT-PCR方法从人前列腺癌细胞系LNcap中克隆Hepsin基因全编码序列,并将其克隆入pIRES2-EGFP表达型质粒,应用酶切和测序方法对重组质粒进行鉴定.结果成功克隆人Hepsin基因cDNA序列并构建了重组表达载体.认为含人Hepsin基因表达型载体的构建为Hepsin基因在前列腺癌中的`功能研究提供了实验基础.
作 者：范志强 徐勇 王春雨 关勇 孙建涛 作者单位：范志强,徐勇,关勇,孙建涛(天津市泌尿外科研究所,天津,300211)王春雨(南开大学分子生物学研究所)
刊 名：山东医药 ISTIC PKU英文刊名：SHANDONG MEDICAL JOURNAL 年，卷(期)： 46(15) 分类号：Q3 关键词：Hepsin基因 克隆 逆转录聚合酶链反应 表达型质粒 序列分析 前列腺肿瘤篇4：大豆类受体蛋白激酶基因(rlpk2)RNAi双元表达载体的构建及其转基因
大豆类受体蛋白激酶基因(rlpk2)RNAi双元表达载体的构建及其转基因
植物类受体蛋白激酶(plant receptor-like kinases RLKs)以其特有的结构在植物的生长、发育和防御等多种生理生化过程中发挥着重要的作用.利用RNA干扰技术(RNA interference RNAi)来研究RLKs的功能已日趋成熟.本文根据植物中hpRNA(hairpin RNA)的原理,以大豆类受体蛋白激酶基因rlpk2为靶基因,在rlpk2-cDNA序列3'端选择312bp作为构建RNAi的序列,借助中间克隆载体,经过三次亚克隆,最后形成含rlpk2-RNAi表达盒的双元表达载体pART27-R2,并转入农杆菌LBA4404.采用农杆菌介导大豆子叶节转化方法,共获得了三株转基因植株.转基因植株RT-PCR分析表明rlpk2基因已被成功敲减(knock-down),并且发现敲减大豆叶片中的.rlpk2基因表达明显改善大豆叶片的光合能力,结合前期研究结果,表明rlpk2基因可能在维持叶绿体的结构及保护叶绿体膜系统的完整性方面起负调节作用.
作 者：李小平邓楠 马媛媛 李鹏丽 王勇 张韧 王宁宁 LI Xiao Ping DENG Nan MA Yuan Yuan LI Peng Li WANG Yong ZHANG Ren WANG Ning Ning 作者单位：李小平,邓楠,马媛媛,李鹏丽,王勇,王宁宁,LI Xiao Ping,DENG Nan,MA Yuan Yuan,LI Peng Li,WANG Yong,WANG Ning Ning(南开大学,植物生物学及生态学系,天津,300071)张韧,ZHANG Ren(Department of Biological Sciences,University of Wollongong,NSW2522,Australia)
刊 名：分子细胞生物学报 ISTIC PKU英文刊名：JOURNAL OF MOLECULAR CELL BIOLOGY 年，卷(期)：2006 39(1) 分类号：Q2 关键词：大豆 类受体蛋白激酶 RNAi 双元表达载体篇5：普通小麦中一个类受体激酶基因的克隆、鉴定和表达分析
普通小麦中一个类受体激酶基因的克隆、鉴定和表达分析
为研究抗白粉病小麦(Triticum aestivum L.)品系在小麦白粉病菌(Blumeria graminis f.sp.tritici)侵染后有无LRK10同源基因表达,依据小麦蛋白激酶LRK10和其它植物蛋白激酶第6亚结构域设计了一个5'-RACE兼并性引物.以接种小麦白粉病菌后的小麦抗白粉病品系“99-2439”幼苗叶片cDNA为模板进行5'-RACE扩增,获得了一个1551 bp长的蛋白激酶基因cDNA片段(S1125,GenBank登录号:AY584533).此后,通过RACE技术成功地获得了该基因的.全长cDNA克隆.该克隆编码637个氨基酸组成的多肽.同源性查寻表明,该基因属于先前命名为wlrk(wheat leaf rust kinase)的小麦类受体蛋白激酶基因家族.与LRK10相似,这个新的小麦类受体蛋白激酶有5个明显的功能域:位于氨基端的疏水信号序列、推测的胞外结构域、跨膜域、高荷电序列和位于羧基端的丝氨酸/苏氨酸激酶域,因此被命名为TaLRK(Triticum aestivum LRK).以小麦肌动蛋白基因为对照,通过半定量反转录PCR(semi-QRT-PCR)技术对叶片中TaLRK基因在小麦白粉病菌接种后的转录水平表达谱进行了研究.结果表明,小麦白粉病菌的侵染使TaLRK基因的转录显著增强.组织特异性表达分析证明,这一基因仅在小麦的绿色部分表达.研究结果提示TaLRK可能参与了小麦的抗白粉病反应.
作 者：牛吉山 张丽娜 王映红 洪德锋 NIU Ji-Shan ZHANG Li-Na WANG Ying-Hong HONG De-Feng 作者单位：河南农业大学国家小麦工程技术研究中心,郑州,450002 刊 名：植物生理与分子生物学学报 ISTIC PKU英文刊名：JOURNAL OF PLANT PHYSIOLOGY AND MOLECULAR BIOLOGY 年，卷(期)： 32(1) 分类号：Q74 关键词：小麦 类受体激酶 克隆 表达 白粉病 wheat RLK cloning expression powdery mildew篇6：重组人瘦素的基因构建、表达及活性鉴定
重组人瘦素的基因构建、表达及活性鉴定
根据NCBI中公布的人瘦素cDNA序列,设计并合成了6个89bp左右的DNA小片段,经重叠延伸PCR扩增获得464bp的.rhLep的完整基因片段.构建pET22b(+)/rhLep表达载体,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达.目的蛋白以包涵体的形式表达,表达量占菌体总蛋白的50%以上.表达产物用Ni2+亲和层析柱纯化,SDS-PAGE结果表明,含6×His标签的目的蛋白的相对分子量约16kD.MTT比色法实验显示,当低剂量(10～30ng/mL)时,rhLep具有促进内皮细胞生长的作用;在高剂量(50～225ng/mL)时,rhLep具有杀伤人内皮细胞的活性.其最大杀伤率达到98.8%.吖啶橙荧光染色观察到高剂量rhLep对人内皮细胞有明显的凋亡作用.以上工作为进一步了解瘦素的体内体外生物活性奠定了基础.
作 者：吴娜 张长弓 谢莲英 王臻 颜江华 WU Na ZHANG Chang-Gong XIE Lian-Ying WANG Zhen YAN Jiang-Hua 作者单位：吴娜,谢莲英,王臻,WU Na,XIE Lian-Ying,WANG Zhen(厦门大学生命科学学院,厦门,361005)张长弓,颜江华,ZHANG Chang-Gong,YAN Jiang-Hua(厦门大学医学院抗癌研究中心,厦门,361005)
刊 名：生物工程学报 ISTIC PKU英文刊名：CHINESE JOURNAL OF BIOTECHNOLOGY 年，卷(期)：2006 22(5) 分类号：Q786 关键词：瘦素 基因构建 表达 细胞存活率篇7：BDNF基因重组逆转录病毒表达载体pLEGFP-BDNF的构建与鉴定
BDNF基因重组逆转录病毒表达载体pLEGFP-BDNF的构建与鉴定
目的.构建脑源性神经营养因子(BDNF)基因重组逆转录病毒表达载体.方法根据BDNF基因已知序列,设计合成一对引物并导入HindⅢ和BamH Ⅰ酶切位点;从大鼠海马组织提取总RNA,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)获得编码BDNF的基因片段,与克隆载体pMD 18-T Simple连接构建pMDT-BDNF质粒;经HindⅢ、BamH Ⅰ双酶切,获得BDNF基因片断再克隆至逆转录病毒载体pLEGFP-N1中构建重组质粒pLEGFP-BDNF.结果限制性内切酶酶切分析和PCR法鉴定表明为正确重组子,测序结果证实与已知序列吻合. 结论构建的重组逆转录病毒表达载体pLEGFP-BDNF含有序列正确的大鼠BDNF基因,可以作为今后治疗老年性痴呆动物模型转基因实验的基因来源.
作 者：李佳楣 龙大宏 冷水龙 罗秀梅 黄文燕 宣爱国 LI Jia-mei LONG Da-hong LENG Shui-long LUO Xiu-mei HUANG Wen-yan XUAN Ai-guo 作者单位：510182,广州,广州医学院人体解剖学教研室 刊 名：中华神经医学杂志 ISTIC PKU英文刊名：CHINESE JOURNAL OF NEUROMEDICINE 年，卷(期)： 5(5) 分类号：Q34 关键词：脑源性神经营养因子 逆转录病毒载体 基因重组篇8：“基因表达载体构建”的教学思考
关于“基因表达载体构建”的教学思考
江苏省南京市天印高级中学 倪同亮
【摘 要】一个完整的基因表达载体上除了目的基因外，还必须有启动子、终止子及标记基因等，如果目的基因自带启动子，是不是就不需要加启动子呢？构建基因表达载体时，用同一种限制酶酶切含目的基因的DNA片段和载体是不是最佳选择？文章主要就这两点进行分析归纳，旨在提高课堂授课效率，提升学生的应试能力。
【关键词】基因表达载体；限制酶；黏性末端；平末端；启动子；乳腺生物反应器
新课程实施已逾十年，伴随着教与学、学与考，高中生物课程知识体系及高考的考察重点已趋于明朗化。如近几年全国各地高考卷频繁对选修Ⅲ“基因工程”这一知识点进行考察，尤其对“基因表达载体的构建”这一核心步骤中所涉及的诸多问题的考查可谓层出不穷。本文从自身教学实践出发，认为应强化以下两点的教学：
一、关于启动子的选择
构建基因表达载体的目的是使目的基因能在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传给下一代，同时，使目的基因能够表达和发挥作用，所以在一个完整的基因表达载体上除了目的基因外，还必须有启动子、终止子及标记基因等。一个基因包含编码区和非编码区，启动子位于编码区上游非编码区序列，它是RNA聚合酶识别和结合部位，有了它才能驱动基因转录出mRNA，最终翻译获得所需要的蛋白质。那么，启动子的选择有要求吗？
我们知道获取目的基因的方法有从基因组文库中获取、有人工合成：如反转录法（cDNA文库）、PCR、直接合成等。人工合成的目的基因往往不含启动子、终止子等，这就必须在构建基因表达载体时加入启动子，否则转录无法启动。问题是加入的一定是原目的基因中的启动子吗？另外，如果是从基因组文库中获取的目的基因是含启动子的，那么，在构建基因表达载体时，是不是就无需加入启动子呢？
人教版选修三《现代生物科技专题》第21页在讲述动物基因工程应用前景时，提到用转基因动物生产药物。将药物蛋白基因与乳腺蛋白基因的启动子等调控组件重组在一起，通过显微注射等方法，导入哺乳动物的受精卵中，将受精卵送入母体，使其发育成转基因动物。转基因动物进入泌乳期后，可以通过分泌乳汁生产所需要的药品，称为乳腺生物反应器。请注意：基因表达载体上的启动子并不是药用蛋白基因自带的启动子，而是乳腺蛋白基因的启动子，这也体现了有些启动子具有特异性，如乳腺蛋白基因的启动子只会在乳腺细胞中启动基因的转录，从而使得药用蛋白基因能在乳腺细胞中成功特异性表达，以此从乳汁中获得药用蛋白。
二、关于限制酶的选择
在构建基因表达载体时，其核心是将目的基因与载体结合，而结合是否符合要求，限制酶的选择至关重要。限制酶的作用是识别双链DNA分子中特定的核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开。DNA经限制酶酶切产生的DNA片段通常有两种形式――粘性末端和平末端。
人教版选修Ⅲ教科书第11页写到用同一种限制酶分别切割目的基因与载体，因为切割后能产生相同的黏性末端，末端之间能发生碱基互补配对而形成重组DNA分子，但此方法是最佳选择吗？ 结合近几年高考试题和教学实践，就限制酶选择的优缺点归纳如下：
1.单酶切（用同一种限制酶酶切）的优缺点。如教材所述，用同一种限制酶分别切割含目的基因的DNA片段与载体。这是最易操作的一种方法，含目的基因的DNA片段与载体在同种限制酶作用下会形成相同的黏性末端，这两个黏性末端通过碱基间的互补配对而连接，进而形成重组DNA分子，但存在着明显的缺点：①酶切后的载体与目的基因在DNA连接酶作用下会发生自身环化。原因是酶切后的目的基因和载体的两端各有一个黏性末端，这两个末端会发生碱基互补配对而使目的基因和载体都会发生首尾相连，从而形成环状DNA分子（载体―载体连接和目的基因―目的基因连接），甚至出现多个载体、多个目的基因连接而成的环状DNA分子，这就加大了筛选的工作量。②目的基因与载体的反向连接。目的基因的插入是要有正确的方向才能正确表达（转录），如果载体和目的基因的酶切使用的是同一种限制酶，那么，目的基因的插入有两种可能：一种是目的基因的最前端刚好插在启动子下游，这样可以正确表达；另一种刚好相反，目的基因的末端插在启动子的下游（目的基因旋转180度），目的.基因则无法表达或表达错误。这两种重组DNA分子，其中只有一种是我们所需要的，同样也加大了筛选的工作量。
2.多酶切（用两种或两种以上的限制酶酶切）的优缺点。用两种或两种以上的限制酶去切割含目的基因的DNA片段和载体，较常见的是用同一组两种限制酶去切割含目的基因的DNA片段和载体，两者都会产生具有两种不同的黏性末端的DNA片段，黏性末端间通过碱基互补配对从而形成重组DNA分子。
多酶切的优点是可以克服单酶切的两大缺点：一是多酶切后目的基因与载体的两侧的黏性末端不相同，因此不会发生自身环化（载体―载体连接和目的基因―目的基因连接）现象。二是可实现目的基因与载体的定向连接。如紧靠启动子下游的是EcoRⅠ位点（GAATTC），而BamH1位点（GGATTC）在后面；目的基因的前端是EcoRⅠ位点，末端是BamH1位点，酶切之后插进去，就可以保证目的基因的前端刚好插到紧靠着启动子的下游，且只产生一种重组DNA，目的基因实现定向插入，这样就可以正确表达。
当然，多种酶酶切的缺点同样存在，用多种酶切割，由于每种限制酶的最适作用条件往往不同（如最适温度、pH值等），所以一般不能将两种酶放在同一环境中使用，而是要进行两次操作，需更换培养液，以保证酶的高效性。因此，使用多酶切的方法在实际操作中较单酶切要复杂得多。
3.慎重选择切割出平末端的限制酶。如果备选的限制酶酶切产生的末端是平末端，则可用相同或不同的限制酶分别切割含目的基因的DNA片段和载体，因为即使是两个不同的平末端，在DNA连接酶的作用下也可以任意连接。此方法的优点不需要含目的基因的DNA片段和载体具有相同的限制酶识别序列，减少了对载体的挑选和改造的工作量。但在实践中，极少用平末端，因为平末端的连接效率比较低，且也会出现目的基因―目的基因、载体―载体的自身环化现象及目的基因和载体的反向连接现象。一般只有在找不到合适切成黏性末端的酶切位点而有平末端切口的情况下才使用。
教师的教学是一个不断积累的过程，积累来自于自身的学习、来自于高考试题的感悟、来自于学生课堂的质疑……我们不可一成不变地照本宣书，而应该做一个发现者、改革者，只有这样才能符合学生的认知规律，才能拓展学生的思维空间，才能提升学生的综合素养。
参考文献：
[1]朱正威，赵占良。普通高中课程标准实验教科书生物选修3[M].北京：人民教育出版社，:11-21.
[2]周荷静。限制酶的多种切割方法及其在高考题中的体现[J].中学教学参考，,（9）。
（编辑：朱泽玲）
篇9：肠道干细胞特异性表达基因Musashi-1启动子的克隆及功能分析
肠道干细胞特异性表达基因Musashi-1启动子的克隆及功能分析
目的:克隆MSI-1基因的启动子,并进行功能鉴定.方法:通过PCR介导重组的方法,从小鼠基因组DNA中克隆MSI-1基因的5'侧翼片段.Northern Blotting检测MSI-1基因在体外细胞系的表达情况,选择转录分析的细胞平台.构建不同长度的5'末端缺失质粒,通过体外瞬时转染和荧光素酶活性测定,检测这些5'末端缺失质粒的相对转录活性.结果:Colon26细胞系和B16细胞系均存在MSI-1基因的表达,但Colon26量更多.MSI-1基因转录起始位点下游73 bp至上游4 939 bp的DNA序列的相对转录活性是pGL3-basic的29.9倍.结论:pMSI+73～-4 939具有驱动报告基因表达的活性,可以作为MSI-1基因的`启动子.MSI-1基因转录起始位点上游4 011～4 939 bp之间存在调节MSI-1基因表达的顺式作用元件,可能与MSI-1基因的组织特异性表达有关.MSI-1基因启动子的克隆将为应用该启动子进行肠道干细胞的分离和纯化提供了条件.
作 者：龚剑峰 朱维铭 高翔 李宁 黎介寿 GONG Jian-feng ZHU Wei-ming GAO Xiang LI Ning LI Jie-shou 作者单位：龚剑峰,朱维铭,李宁,黎介寿,GONG Jian-feng,ZHU Wei-ming,LI Ning,LI Jie-shou(南京大学医学院临床学院(南京军区南京总医院)解放军普通外科研究所,江苏,南京,210002)高翔,GAO Xiang(南京大学模式动物研究所,江苏,南京,210093)
刊 名：肠外与肠内营养 ISTIC PKU英文刊名：PARENTERAL & ENTERAL NUTRITION 年，卷(期)： 13(5) 分类号：Q344.13 关键词：肠道干细胞 Musashi-1基因 启动子篇10：维甲酸受体β基因RNAi表达质粒的构建及其对A549细胞增殖和分化的影响
维甲酸受体β基因RNAi表达质粒的构建及其对A549细胞增殖和分化的影响
目的:利用RNA干扰(RNAi)技术,构建针对维甲酸受体(RAR)β基因的小干扰RNA(siRNA)表达质粒,诱导RARβ基因沉默,并观察其对肺癌细胞A549株的细胞周期和增殖的影响.方法:依据设计siRNA的原则,针对人RARβ的mRNA序列,设计并合成编码siRNA的.2条寡核苷酸序列,经退火成互补双链,再克隆到pSUPER-NEO-GFP真核表达载体中构建重组体pSUPER-RARβ,转染至A549细胞中,以空质粒和RARβ高表达质粒转染为对照,用Western印迹检测RARβ基因的表达,并采用MTT试验检测转染后细胞株的增殖和细胞分化情况.结果:表达人类RARβ基因的siRNA重组表达质粒构建成功;MTT试验结果表明,转染的A549-RARβ-si细胞增殖能力降低.结论:采用RNAi技术特异阻断RARβ基因表达,通过转染A549细胞,可使其细胞形态发生变化,并抑制其细胞生长.
作 者：林婵 王力 边六交 LIN Chan WANG Li BIAN Liu-Jiao 作者单位：林婵,边六交,LIN Chan,BIAN Liu-Jiao(西北大学,基因工程中心,陕西,西安,710069)王力,WANG Li(中国科学院,上海生命科学院研发中心,上海,200233)
刊 名：生物技术通讯 ISTIC英文刊名：LETTERS IN BIOTECHNOLOGY 年，卷(期)：2008 19(3) 分类号：Q78 Q25 关键词：维甲酸受体β RNA干扰 A549细胞 基因表达抑制★外源超氧化物歧化酶基因MnSOD在玉米中的过量表达及抗逆性的提高
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